Namun, ketika spektrum emisi tumpang tindih, fluoresensi dari lebih dari satu fluorokrom dapat dideteksi. Untuk mengoreksi tumpang tindih spektral ini, proses kompensasi fluoresensi digunakan. Ini memastikan bahwa fluoresensi yang terdeteksi dalam detektor tertentu berasal dari fluorokrom yang sedang diukur.
Mengapa kita membutuhkan kompensasi dalam flow cytometry?
Kompensasi diperlukan untuk eksperimen aliran sitometri karena fisika fluoresensi. Sebuah fluorochrome bersemangat, dan memancarkan foton dalam berbagai panjang gelombang. Beberapa foton tersebut tumpah ke detektor kedua, menyebabkan sampel bernoda tunggal tampak positif ganda.
Apa tujuan utama menggunakan sel kompensasi?
Tujuan utamanya adalah untuk memungkinkan pengukuran fluoresensi sebenarnya di saluran utama yang terkontaminasi oleh limpahan dari fluorofor tetangga. Oleh karena itu, kompensasi mengoreksi fluoresensi "pelanggaran" antara fluorofor. Namun, ini tidak sempurna dan tidak dapat memperbaiki semua efek yang tidak diinginkan.
Apa itu matriks kompensasi?
Matriks kompensasi dihitung menggunakan file kontrol fluoresen warna tunggal yang dikumpulkan di ImageStream atau FlowSight dengan semua saluran yang dikumpulkan dan tanpa adanya iluminasi brightfield atau SSC.
Apa itu kompensasi spektral?
Menggunakan spektralkompensasi berarti bahwa sinyal dari detektor non-primer masih digunakan untuk meningkatkan sinyal penanda yang sebenarnya jika memungkinkan. Sampel kontrol utama digunakan untuk penamaan parameter. … Sampel yang digunakan untuk detektor primer juga membantu memberi nama parameter tersebut setelah kompensasi spektral.