Setelah sel muncul terlepas tambahkan 2 volume media pertumbuhan lengkap yang telah dihangatkan untuk menonaktifkan tripsin. Bubarkan media secara perlahan dengan memipetkan ke permukaan lapisan sel beberapa kali untuk memastikan pemulihan >95% sel.
Bagaimana cara menghentikan aktivitas tripsin?
Pencernaan tripsin dapat dihentikan dengan pembekuan atau dengan menurunkan pH reaksi di bawah pH 4 dengan menambahkan asam format, asetat, atau trifluoroasetat (tripsin akan kembali aktif ketika pH dinaikkan di atas pH 4). Sampel yang telah dicerna dapat disimpan pada suhu -20°C.
Apa yang menetralkan tripsin?
Sebuah buffer mengandung ion kalsium dan magnesium juga akan memperlambat aktivitas tripsin. Namun FBS adalah cara yang lebih efektif untuk menghambat aktivitas tripsin.
Apakah serum menonaktifkan tripsin?
Serum menonaktifkan sisa tripsin yang tersisa dari pencernaan enzimatik ginjal dan enzim proteolitik selanjutnya disintesis oleh sel. Sel-sel tripsin yang baru dapat ditumbuhkan menjadi lapisan tunggal tanpa adanya serum asalkan mereka dicuci berulang kali untuk menghilangkan sisa tripsin.
Berapa banyak media yang diperlukan untuk menonaktifkan tripsin?
Selama Anda menggunakan setidaknya rasio 1:1 dari 5-10% serum-medium yang mengandung tripsin dengan tripsin Anda harus ada penghambatan yang lebih dari cukup, diikuti dengan sentrifugasi dan pertukaran sedang dengan media baru.
