Pertama-tama, EcoR1 dan Xba1 meninggalkan overhang 5' ketika mereka mencerna DNA (seperti halnya Nde1). Dalam kedua kasus, ujung 3' tersembunyi, itulah sebabnya poliermase dapat menambahkan basa. Kedua, semua polimerase hanya dapat menambahkan basa ke ujung 3', jadi Klenow akan menambahkan 4 basa ke ujung 3' yang menyusut dari kedua situs untuk menghasilkan ujung yang tumpul.
Apakah enzim restriksi meninggalkan 5 fosfat?
Vektor dan sisipan yang dicerna oleh enzim restriksi mengandung modifikasi terminal yang diperlukan (5' fosfat dan 3' hidroksil), sedangkan fragmen yang dibuat oleh Polymerase Chain Reaction (PCR) mungkin tidak.
Dapatkah ujung tumpul diikat?
Ligasi ujung tumpul
Ligasi ujung tumpul tidak melibatkan pasangan basa dari ujung yang menonjol, jadi setiap ujung tumpul dapat diligasi ke ujung tumpul lainnya. Ujung tumpul dapat dihasilkan oleh enzim restriksi seperti SmaI dan EcoRV.
Apakah Taq polimerase menghasilkan ujung yang tumpul?
Yes… Taq Polymerase menambahkan A-Overhangs jika Anda mempertahankan langkah ekstensi akhir pada 72 dC pada PCR. Banyak digunakan untuk Kloning TA.
Mengapa menggunakan fragmen Klenow dalam pengurutan DNA?
Fragmen Klenow sangat berguna untuk tugas-tugas berbasis penelitian seperti: Sintesis DNA untai ganda dari templat untai tunggal . Mengisi ujung 3' fragmen DNA yang menyusut untuk membuat 5' menjorok tumpul . Mencerna tonjolan 3' yang menonjol.
